一、发酵力的测定
酵母能使酒醅中的还原糖发酵,生成酒精和二氧化碳,反应式为:
C6H12O6→2C2H5OH+2CO2
所以可以使用在一定条件下制备的糖化液为培养基,测定发酵中生成的CO2量,以衡量曲的发酵力。
二、糖化酶活力的测定
固体曲中糖化酶(包括α-淀粉酶和β-淀粉酶)能将淀粉水解为葡萄糖,进而被微生物发酵,生成酒精。糖化酶活力高,淀粉利用率就高。
糖化力的定义是1.0g干曲在40℃、pH4.6条件下,1小时分解可溶性淀粉生成1mg葡萄糖,为1个酶活力单位,以u/g表示。
测定低浓度糖时,可采用降低斐林液浓度的标准糖液反滴定法。为使终点易于判断,加入亚铁氰化钾,溶解氧化亚铜红色沉淀生产浅黄色溶液。
三、液化力的测定
液化型淀粉酶俗称α-淀粉酶,又称α-1,4糊精酶,能将淀粉中α-1,4葡萄糖苷键随机切断成长短不一的糊精、麦芽糖、葡萄糖而迅速液化。
液化力的定义:1.0g干曲在60℃、pH 6条件下,1h液化1.0g可溶性淀粉,为1个酶活力单位,以u/g表示。
四、蛋白酶活力的测定
微生物的生育及酶的生成都需要蛋白质作氮源,白酒中许多香味物质也来自蛋白质的分解产物。所以在白酒酿造过程中不能忽视蛋白质及蛋白酶的分解能力。
蛋白酶是水解蛋白质肽键的酶类的总称。它能将蛋白质水解为氨基酸,通常以适宜于酶活力的pH值将蛋白酶分为酸性蛋白酶(pH2.5-3)、中性蛋白酶(pH7左右)和碱性蛋白酶(pH8以上)。其酶活力测定方法基本相同,仅控制不同的pH值进行测定而已。在测定蛋白酶活力时,以酪蛋白(干酪素)为底物,蛋白酶将酪蛋白水解,生成含酚基的酪氨酸,在碱性条件下使福林(Follin)试剂还原产生蓝色(钼蓝和钨蓝的混合物),用分光光度计在680nm测定吸光度。
蛋白酶活力的定义是1.0g固体干曲在40℃和一定的pH下,1min将酪蛋白水解产生1μg氨基酸为1个酶活力单位,以u/g或(u/mL)表示。
五、酯化力的测定
酯化酶是脂肪酶和酯酶的统称。
白酒香味是以酯香为主体的复合体,白酒酿造过程中酯酶的作用是使一个酸元和一个醇元结合、脱水而生成酯,反应式如下:
RCOOH+HOC2H5⇌RCOO C2H5+H2O
但酯化过程是一个可逆反应,酯酶既能产酯,也能使酯分解,例如:
CH3COOC2H5+O2→CH3COOH+CH3COOH
CH3COOH+O2→2H2O+2CO2
特别在不适宜的酶化条件下(如温度、pH值、空气量等),会将已生成的酯迅速分解。因而不仅要选育产酯能力强的菌,而且要考虑其酯分解能力相对较弱,才能使最终产物中留存较多的酯,目前确认能生成酯化酶的酯化菌在细菌、霉菌、酵母菌中存均在。
以己酸乙酯计,酯化力是1g干曲在30℃~32℃反应100h所产生的己酸乙酯的mg数。